Western Blot Nedir?

Western Blot veya immünoblot, bir zar üzerindeki spesifik proteinleri tespit etmek için kullanılabilen moleküler bir biyolojik yöntemdir.

Teknik birkaç adımdan oluşur. Bunlar;

• Protein numuneleri bir elektroforez jeline yüklenir ve moleküler ağırlıklarına göre ayrılır. Bunu yapmak için jel içinden elektrik akımı geçirilir. Proteinler ne kadar büyükse, göçleri o kadar yavaş olur.
• Proteinler göç ettikten sonra, nitroselüloz veya poliviniliden florürden (PVDF) yapılabilen bir zara aktarılırlar. Proteinler, zar ve proteinler arasındaki hidrofobik ve iyonik etkileşimlerle zara bağlanır.
• Membranı bloke etme aşaması, antikorlar ve membran arasındaki daha sonra spesifik olmayan etkileşimleri sınırlamak için esastır. Bloklama, konsantre bir protein solüsyonunda gerçekleştirilir.
• Prensip, izlenecek proteinlere özgü etiketli antikorların zara uygulanmasıdır. Bu şekilde jel üzerindeki konumları gözlemlenebilir.